细胞株是通过单细胞的分离培养或筛选方法形成的细胞群体，这些细胞在整个培养过程中需保持其特殊性质或标志。然而，在体外培养的过程中，细胞株常常会遇到一些问题，例如无法在培养皿上贴壁生长、生长缓慢或甚至死亡。为了有效地应对这些挑战，以下措施可作为参考：

一、细胞株无法在培养器皿上贴壁生长

1. **胰酶消化过度**：缩短胰酶消化时间或减少胰酶用量。
2. **支原体污染**：隔离细胞株并检测是否感染支原体；定期清洗通风厨和培养箱，如发现污染，滅菌处理并丢弃受污染的细胞。
3. **培养基缺乏附着因子**：确保无血清配方中含有附着因子，或使用经过包被的培养板。

二、细胞株生长缓慢

1. **培养基或血清变化**：比较不同培养基中葡萄糖、氨基酸等成分的差异；通过生长实验比较新老批次血清；增加细胞的初始接种密度。
2. **生长促进成分缺乏**：更换培养基，添加新鲜的生长促进成分，如L-谷氨酰胺。
3. **轻度细菌或真菌污染**：在未添加抗生素的情况下进行培养，如被污染，经过灭菌处理后丢弃。
4. **储存不当**：血清应储存于-5℃至-20℃之间，培养基在2℃~8℃下避光储存，尽量减少接触光线。
5. **接种密度低**：提高活细胞的接种密度。
6. **细胞衰老**：丢弃老化的细胞，选择代数较少的细胞。
7. **支原体污染**：同上，隔离检测和处理。

三、培养基pH值变化迅速

1. **培养箱CO2分压设置错误**：根据NaHCO3浓度，调整培养箱的CO2分压，保持在5%-10%的范围内。
2. **瓶盖过紧**：松动瓶盖1/4圈以助气体交换。
3. **缓冲能力不足**：添加HEPES缓冲液，使终浓度达到10-25 mM。
4. **盐含量不当**：在CO2平衡环境使用以Earle平衡盐为基础的培养基，在大气条件下使用Hanks平衡盐为基础的培养基。

四、细胞株凋亡

1. **培养箱中无CO2**：监测并及时更换气瓶，检查管路是否漏气，并减少开启培养箱的频率。
2. **温度波动**：时刻监控培养箱内温度并及时校正。
3. **抗生素毒性**：减少抗生素用量，使用无血清培养基时，抗生素浓度应降低至1/10。
4. **细胞复苏过程受损**：使用新的细胞进行实验。
5. **渗透压不合适**：检查营养基的渗透压，确保在适宜范围内。
6. **毒性代谢产物积累**：更换为新鲜培养基以去除积累的代谢产物。

五、悬浮细胞株集成团

1. **存在钙离子和镁离子**：用不含钙离子和镁离子的溶液清洗细胞，轻轻处理成单细胞悬液。
2. **支原体污染**：同上，进行适当隔离和检测。
3. **蛋白水解酶消化过度**：用0.001%的DNA酶I处理细胞；用PBS冲洗后再接种到新培养基中。

以上是细胞株在培养过程中可能遇到的问题、原因及解决方案。希望这些建议能够帮助大家在培养细胞株时更顺利，特别是在使用尊龙凯时产品的情况下，可以更好地维护细胞株的健康和生长环境。