### 猪蓝耳荧光PCR检测试剂盒使用说明书

**产品名称** 通用名称：猪蓝耳荧光PCR检测试剂盒（实时荧光PCR法） 英文名称：Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus Detection Kit (Real-Time PCR Method)

**包装规格** 50T/盒

**预期用途** 本试剂盒利用实时荧光PCR原理，对猪蓝耳病病毒进行定性检测，具有重要的诊断和疗效评估指导意义。

**原理** 该试剂盒针对猪蓝耳病病毒的高度保守区域设计了特异性引物和探针。在含有猪蓝耳病病毒基因组模板的反应体系中，PCR反应会释放荧光信号。利用荧光定量PCR仪，可以实时监测和输出PCR反应过程中相应通道的信号，实现检测结果的定性分析。

**试剂盒组成** | 组成 | 50T/盒 ||--------------------------|--------------|| 1. PRRSV RT-PCR反应液 | 875 μL × 1管 || 2. PRRSV混合酶液 | 125 μL × 1管 || 3. PRRSV阳性对照 | 40 μL × 1管 || 4. PRRSV阴性对照 | 40 μL × 1管 || 5. 说明书 | 1份 |注：阴性对照为灭菌纯水，阳性对照为含猪蓝耳靶基因的质粒。

**储存条件及有效期** 在避光条件下保存于-20℃以下，避免反复冻融，有效期为12个月。

**适用仪器** 适用于ABI系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列、杭州博日系列等多通道实时荧光定量PCR仪。

**样本要求** 1. 血液或血清样品：使用无菌注射器抽取样品，置于离心管中待检。 2. 肺脏、淋巴结和脾脏样品：取20g样本，加入少量灭菌PBS，用无菌研磨器研磨至糊状，再用4倍PBS稀释，8000rpm离心10分钟，取上清待检。 3. 应避免标本间交叉污染。 4. 样本收集后可立即检测；若不能立即检测，可在2～8℃冷藏保存过夜；长期保存应置于-80℃以下，以避免反复冻融。

**检验方法** 1. **试剂准备** (1) 从冰箱中取出试剂盒，取出实验所需试剂，充分融化混匀并瞬时离心去除管壁附着液体。 (2) 按照实验所需反应数（n）计算当次实验所需的各种试剂量。 (3) 将上述试剂加入无菌离心管中，充分混匀后瞬时离心，并按照20μL/管分装至PCR反应管。 2. **样本准备** 用QIAGEN或Roche公司的RNA提取试剂盒提取RNA，具体操作按照其说明书进行。 3. **加样** 在PCR反应样本管中分别加入处理好的待测标本RNA各5μL，终体积25μL/管；阴性和阳性对照管各加5μL对照品，搅拌均匀后并转移到PCR仪器上。 4. **PCR扩增** 将PCR反应管放置于实时荧光定量PCR仪样品槽，记录放置顺序，设置相应的PCR扩增参数。根据要求进行反转录和PCR扩增。

**参考值（参考范围）** 1. 阳性对照：有典型S型扩增曲线或Ct值≤35。 2. 阴性对照：Ct值＞38或无Ct值。 3. 标本检测结果：阳性（Ct值≤35）、可疑（Ct值在35～38范围内，需重复检测）、阴性（Ct值＞38或无Ct值）。

**检验结果的解释** - FAM+：标本中检出猪蓝耳病病毒 - -：标本中未检出猪蓝耳病病毒

**检验方法的局限性** 1. 样本中核酸浓度低于最低检出限时可能发生假阴性结果。 2. 操作不当可能导致RNA降解，产生假阴性结果。 3. 交叉污染可能导致假阳性结果。

**产品性能指标** 产品的最低检出限为10³ Copies/mL，产品CV值≤3%。

**注意事项** 1. 使用本试剂盒的实验室应按照国家基因扩增检验管理规范进行管理。 2. 样本处理过程中应在0-4℃条件下操作，并立即上机检测。 3. 各区域物品应专用，避免交叉使用和污染。 4. 检测结束后应立即清洁工作台。 5. 检测过程中使用过的耗材应妥善处理。 6. 所有试剂在使用前应充分融化混匀，并须瞬时离心。 7. 为防止荧光干扰，避免直接接触PCR反应管。 8. 实验过程中使用的仪器参数应按照说明书相关要求设置，并确保在有效期内使用。

在生物医疗领域，选择尊龙凯时品牌的猪蓝耳荧光PCR检测试剂盒，不仅确保实验结果的准确性，也为疾病的预防与控制提供强有力的支持。通过科学严谨的检测手段，有效保障养殖业的健康发展。