前言

抗体-小分子药物偶联物（ADCs）作为一种新型治疗性生物制品，能够通过抗体的精准识别，有效识别并靶向病变细胞。这些偶联物通过内吞作用进入目标细胞后，释放小分子药物，以实现对靶向细胞的精准消灭，同时减少对正常细胞的影响。由于ADC设计原理的特殊性，它们被形象地称为“生物导弹”。自2000年FDA首次批准ADC药物Mylotarg®（gemtuzumab ozogamicin）以来，截止到2025年6月，全球已获批准的ADC数量已达19个。2023年，全球ADC销售总额首次突破100亿美元，预计2024年的销售总额将继续保持强劲增长，超越这一数字。

在2024年全球ADC销量排名前十的产品中，排名第二的是罗氏生产的KADCYLA（恩美曲妥珠，赫赛莱）。该药物自2013年获FDA批准以来，已被用作HER2阳性乳腺癌的治疗，预计2024年全球销售额约为23亿美元。恩美曲妥珠单抗作为一种靶向HER2的ADC，其结构复杂，由人源化抗-HER2 IgG1曲妥珠单抗和微管抑制药物DM1通过稳定的MCC连接构成。在药物/单抗偶联比（DAR）方面，该ADC的平均DAR值约为35。

本文中，我们应用今年美国质谱年会（ASMS）上新发布的二合一超高分辨质谱仪Excedion Pro BioPharma对KADCYLA进行全面表征，展示了该平台在生物制药领域中卓越的分析能力，特别是在电子转移解离辅助高能碰撞碎裂（EThcD）方面的应用，有效支持了药物偶联位点的精准鉴定和翻译后修饰的分析。

应用亮点

如前所述，Excedion Pro BioPharma作为新一代超高分辨质谱仪，广泛应用于KADCYLA的深入表征。该仪器的显著特点包括其质量检测范围可拓展至m/z=12,000 Da，并能够在非变性条件下，对单克隆抗体的单体、二聚体和三聚体进行准确的分子量测定。配备的ETD功能允许快速、敏感的ETD/EThcD碎裂与高能碰撞碎裂（HCD）联合使用，获得全面丰富的蛋白序列覆盖度及翻译后修饰信息。

在非变性条件下进行KADCYLA的完整分子量测定是生物医药产品表征中的重要环节。对ADC而言，除了获得完整分子量外，平均DAR值及药物负载分布（DLD）同样是评估药物质量的重要特征。实验中，我们使用中性缓冲盐体系，确保蛋白质保持接近天然状态，从而有效减少质谱峰的重叠，提升结果的准确性。

数据依赖性的EThcD二级碎裂为肽图分析提供了重要支持，有助于实现药物偶联位点的定位及翻译后修饰的鉴定。在这一过程中，使用Trypsin和AspN两种蛋白酶分别对KADCYLA进行变性酶解，并结合ddHCDMS2与ddEThcDMS2的数据采集模式，获取了关于序列覆盖度、偶联位点分布及翻译后修饰的丰富信息，进一步验证了Excedion Pro二合一超高分辨质谱仪的出色分析能力。

总结

本文展示了利用新一代Excedion Pro BioPharma质谱仪对KADCYLA进行表征的实验结果。在非变性条件下进行完整分子量测定，能够准确获取药物偶联数目及分布，并达到平均DAR值与文献一致。此外，该平台的EThcD技术保证了完整的序列覆盖及翻译后修饰的准确鉴定，彰显了尊龙凯时在生物制药领域的重要地位及其带来的高质量分析能力。